目前，在血液肿瘤的诊断中，流式细胞术发挥着非常重要的作用。在高博第三届淋巴瘤&骨髓瘤国际高峰论坛上，高博医学诊断中心流式细胞实验室主任、整合诊断专家组喻新建指出，“流式细胞术与传统病理诊断技术可相辅相成，更好地促进血液肿瘤的精准诊断。” 除外常规的流式细胞术外，组织流式技术被认为是以髓外肿物为首发症状的血液肿瘤诊断的重要手段，但当前这一技术在血液肿瘤（包括淋巴瘤）诊断中的价值被低估或未得到充分认识。博医荟特将喻新建主任对组织流式技术应用的详细解析整理成文，以飨读者。

01  划重点 组织标本可以做流式！

从概念上来讲，流式细胞术（flow cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球，细菌等）逐个进行快速定量分析和分选的技术（图1）。

图1  流式细胞术流程图

那么从定义出发，是否只有呈现液体形态的标本才能做流式检测呢？喻新建主任指出，事实上，除了本来就是液体的标本（如骨髓，外周血和体液等）外，新鲜的实体组织标本，无论是活检还是穿刺获得的，均可以进行流式检测，只需要将其制备成液体状态（细胞悬液）即可。

那如何制备流式检测适用的组织标本细胞悬液呢？酶处理法和机械法是实验室常用的两种组织细胞悬液制备方法。结合多年的经验，喻新建主任表示，酶解消化法主要通过胰蛋白酶或胶原酶消化组织块获得细胞悬液，可能会影响细胞蛋白的表达，因而更推荐物理机械法制备新鲜组织标本细胞悬液。

02  认知不足 组织标本目前很少做流式

数据显示，目前我国临床医生很少送检组织标本进行流式检测。对于造成这一现状具体原因，喻新建主任认为可能与以下几方面因素相关。

1.临床医生对组织流式细胞术在临床中的应用价值认知不足。

2.临床与实验室间的脱节。与国外组织标本是否需要进行流式检测由专门的血液病理医生决定不同，目前我国主要是由临床医生按需求决定是否送组织标本做流式检测。

3.我国临床各实验室间相对独立，比如许多单位的病理科与流式实验室缺少交流，缺乏对不同技术及其临床应用的了解。

03  实践出真知 必要时应该用组织标本做流式

已有充足的临床循证证据证实，组织标本流式检测对于血液肿瘤诊断的重要性。

早在2013年，发表在Cytometry Part B: Clinical Cytometry的一项研究（n=1790）表明，对疑似淋巴瘤的组织样本常规进行流式检测是NHL形态学诊断的基本辅助手段，可以提高组织学评估的性能，从而实现精准诊断。

喻新建主任分享了北京博仁医院过去2年内组织标本流式检测的统计结果。数据表明，在428例进行组织流式检测的患者中，有361例具有可比的同期病理结果，两者的一致率为74.5%，阳性一致率为100%（图2）。

图2  北京博仁医院过去2年组织流式标本检测的统计结果

组织流式检测的优点，喻新建主任认为主要有简单快速、特异性强、敏感度高，较形态学和病理学检查主观因素更少，可在一定程度上弥补病理的短板。喻新建主任通过以下病例的分享让与会者对于组织流式的优势有了更加直观的理解。

病例1 病理诊断不明，辅助进行明确诊断

2016年6月患者行腹股沟淋巴结肿大切除，并在多家中心进行淋巴结病理检测，但报告结果不一致，包括混合淋巴瘤、T淋母、非典型淋巴结增生。2018年11月，患者出现颈部、锁骨上淋巴节肿大，将颈部淋巴结穿刺标本送检流式检测后，发现CD19、Lambda表达阳性，最终协助判定为B细胞淋巴瘤（图3）。一周后，基因报告检测到IgHV、IgK克隆基因重排。最终会诊后病理诊断为：弥漫大B细胞淋巴瘤，非特指型（DLBCL，NOS）；非生发中心B细胞来源（Hans模型）。

图3

病例2  协助临床快速诊断

2021年3月31日，患者因纵隔占位送检骨髓流式检测，结果骨髓中未发现肿瘤细胞。4月2日下午，送纵隔穿刺组织标本到高博医学诊断中心做流式检测，同时送病理检测。当天晚上，流式检测报告为T淋母细胞淋巴瘤（图4-5）。4月8日，病理检测出报告显示（纵隔肿物）穿刺组织为T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病（T-LBL/ALL）。

图4

图5

04  流式小课堂 组织标本应该这样送检流式！

那基于我国现状，临床医生在确认送检组织流式时，在组织标本采集时应如何做呢？喻新建主任总结了组织流式标本采集的注意事项，其中的关键即是在保证细胞活性的同时，得到足够多的可分析细胞（图6）。

图6

喻新建主任总结了组织标本流式检测失败的常见原因，主要包括以下几个方面：

第一，组织坏死，细胞活性差：疾病本身造成、标本采集转运、标本制备；

第二，没有采集到肿瘤组织或肿瘤细胞数量不足：灶状分布不均、肿瘤细胞分布较少的类型如霍奇金淋巴瘤；

第三，细胞脆性增加，标本处理时易丢失，检测结果阴性率高：如DLBCL等大细胞淋巴瘤等；

第四，非造血淋巴细胞来源：实体瘤；

第五，实验室技术问题：细胞悬液制备中出问题。

如此看来，要做好组织流式，不仅需要临床医生充分认识其临床价值，同时还需要正确取材和制备。只有这样，才能更好地发挥这一检测技术的临床价值，为患者提供更加快速精准的诊断。